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· 資料簡介： 主要用途 純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位熒光測定試劑是一種旨在通過高度敏感的陽離子熒光羰花青染料結(jié)合到線粒體基質(zhì)，其熒光的增強或減弱說明線粒體膜電位的變化，即內(nèi)膜電負性的增高或降低，來分析線粒體內(nèi)膜功能的完整性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種線粒體制備物的功能檢測。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，活體檢測，操作極為簡易，性能穩(wěn)定。 技術(shù)背景 陽離子熒光染色劑羰花青（5,5＇,6,6＇-tetrachloro-1,1＇,3,3＇-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一種對膜電位高度敏感的染色劑。它特異性地進入線粒體，分布和結(jié)合在線粒體基質(zhì)上。線粒體膜電位的高低變化決定了羰花青的分布濃度。電位高，羰花青形成聚集體，而濃度高，熒光顯色為紅色或桔紅色；反之，則為綠色。熒光減弱表明線粒體內(nèi)膜功能受到損害。 產(chǎn)品內(nèi)容 保存液（Reagent A） 毫升 染色液（Reagent B） 微升 稀釋液（Reagent C） 毫升 產(chǎn)品說明書 1份 保存方式 保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent B）避免光照；有效保證12月 用戶自備 1.5毫升離心管：用于線粒體染色的容器 比色皿或96孔板：用于熒光定量的容器 （共聚焦）熒光顯微鏡：用于線粒體熒光定性分析 熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于線粒體熒光定量分析 實驗步驟 實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀釋液（Reagent C）放進37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升稀釋液（Reagent C），混勻后，在冰槽里靜置，并標記為染色工作液，放在暗室里。然后進行下列操作。 一、（共聚焦）熒光顯微鏡觀察（大量檢測） 1． 從純化的線粒體樣品中移出至少含107細胞中提取的線粒體到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管，置入冰槽里 2． 加入適量的保存液（Reagent A）至*終容量為100微升（含有50微克線粒體蛋白質(zhì)為理想狀態(tài)） 3． 加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀釋液（Reagent C）的染色工作液，輕柔混勻 4． 放進暗室里，在室溫下孵育10分鐘（注意：檢測前置于冰槽里） 5． 即刻移入到載玻片上 6． 放上蓋玻片，在（共聚焦）熒光顯微鏡下進行觀察（單濾波）： 觀察紅色熒光：濾波器激發(fā)波長490nm，散發(fā)波長590nm或羅丹明（rhodamine）濾波器激發(fā)波長540nm， 散發(fā)波長570nm或德州紅（Texas Red）濾波器激發(fā)波長590nm，散發(fā)波長610nm―― 二、（共聚焦）熒光顯微鏡觀察（小量檢測） 1． 從純化的線粒體樣品中移出10微升純化線粒體（含有5微克線粒體蛋白為理想狀態(tài)）到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管，置入冰槽里 2． 加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀釋液（Reagent C）的染色工作液，輕柔混勻 3． 放進暗室里，在室溫下孵育10分鐘（注意：檢測前置于冰槽里） 4． 即刻移入到載玻片上 5． 放上蓋玻片，在（共聚焦）熒光顯微鏡下進行觀察（單濾波）： 觀察紅色熒光：濾波器激發(fā)波長490nm，散發(fā)波長590nm或羅丹明（rhodamine）濾波器激發(fā)波長540nm， 散發(fā)波長570nm或德州紅（Texas Red）濾波器激發(fā)波長590nm，散發(fā)波長610nm―― 三、熒光酶標儀檢測 1． 分別加入xx微升含有染色液（Reagent B）和稀釋液（Reagent C）的染色工作液到96孔板的每個孔里 2． 加入10微升純化的線粒體樣品（含有5微克線粒體蛋白為理想狀態(tài)） 3． 輕輕搖勻96孔板 4． 放進暗室里，在室溫下孵育10分鐘（注意：檢測前置于冰槽里） 5． 即刻放進熒光酶標儀測定（單一測定）： 激發(fā)波長490nm，散發(fā)波長590nm，獲得相對熒光單位（RFU）： 三、熒光分光光度儀比色皿檢測 1． 從純化的線粒體樣品中移出至少含107細胞中提取的線粒體到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管，置入冰槽里 2． 加入適量的保存液（Reagent A）至*終容量為100微升（含有50微克線粒體蛋白為理想狀態(tài)） 3． 加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀釋液（Reagent C）的染色工作液到1毫升比色皿里（若使用2毫升比色皿，用量相應(yīng)加倍） 4． 加入100微升純化的線粒體樣品 5． 上下傾倒比色皿，輕輕混勻 6． 放進暗室里，在室溫下孵育10分鐘（注意：檢測前置于冰槽里） 7． 即刻放進熒光分光光度計測定（單一測定）： 激發(fā)波長490nm，散發(fā)波長590nm，獲得相對熒光單位（RFU）： 訂購信息 編號名稱規(guī)格 G&VS10013.1純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位熒光測定試劑盒10/100次 G&VS10013.1A保存液（Reagent A）5毫升 G&VS10013.1B 染色液（Reagent B） 500微升 G&VS10013.1C 稀釋液（Reagent C） 50毫升 G&VS12042纈氨霉素溶液（0.1 mM） 10毫升 G&VS30030.1 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒100次 產(chǎn)品編號 名稱 規(guī)格 G&VS10006.1 動物細胞/組織線粒體粗提分離試劑盒 10/50次 G&VS10006.2 動物細胞/組織活性線粒體分離試劑盒 10/50次 G&VS10006.3 動物細胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 10次 G&VS10013.1 純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒 100次 G&VS10013.2 活體細胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒 20次 G&VS10013.3 完全線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒 20次 G&VS10013.4 活體組織線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒 10次 G&VS10013.5 真菌/酵母細胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒 20次 G&VS10014.1 線粒體外膜功能檢測試劑盒 20次 G&VS10014.2 純化線粒體細胞色素C氧化酶活性測定試劑盒 20次 G&VS10014.3 細胞/組織懸液細胞色素C氧化酶活性測定試劑盒 20次 G&VS10014.4 純化細胞色素C氧化酶活性測定試劑盒 20次 G&VS10014.5 真菌/酵母細胞懸液細胞色素C氧化酶活性測定試劑盒 20次 G&VS10014.6 植物細胞色素C氧化酶活性測定試劑盒 20次 G&VS10015 線粒體功能詹納斯綠B（JGB）染色試劑盒 20次 G&VS10019.1 活體細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 100/200次 G&VS10019.2 植物組織線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 20次 G&VS10019.3 真菌/酵母細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 100次 G&VS10019.4 純化線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 100次
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