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· 上 傳 者： 上海極威生物科技有限公司
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· 所屬分類：應(yīng)用方法
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· 資料簡介： β-試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版） 主要用途 冰凍切片組織衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑是一種旨在以X-Gal為底物，通過切片組織內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達(dá)，催化生成深藍(lán)色的沉積產(chǎn)物，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的組織細(xì)胞作為組織復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老組織細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。其適用于各種人體和動物的冰凍組織切片。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，著色敏感。 技術(shù)背景 細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，尤其在酸性條件下，細(xì)胞內(nèi)源性β-半乳糖苷酶活性增加，而成為細(xì)胞衰老的生物學(xué)標(biāo)記。 產(chǎn)品內(nèi)容 清理液（Reagent A） 毫升 固定液（Reagent B） 毫升 酸性液（Reagent C） 毫升 稀釋液（Reagent D） 毫升 染色液（Reagent E） 毫升 產(chǎn)品說明書 1份 保存方式 保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀釋液（Reagent D）和染色液（Reagent E）用鋁箔封裹，避免光照；有效保證6月 用戶自備 15毫升錐形離心管：用于配制染色工作液 恒溫培養(yǎng)箱：用于染色孵育 光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色后的組織細(xì)胞 實驗步驟 實驗開始前，將試劑盒里的染色液（Reagent E）從－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液（Reagent D）到15毫升錐形離心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混勻后，置入37℃恒溫水槽里預(yù)熱，標(biāo)記為染色工作液。然后進(jìn)行下列操作： 1． 準(zhǔn)備10片待測的厚為5至10微米的冰凍切片 2． 置于室溫下，小心加上xx微升預(yù)冷的清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面 3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 4． 小心加上xx微升預(yù)冷的固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面 5． 室溫下孵育10分鐘 6． 小心移去切片上的固著液（Reagent B） 7． 小心加上xx微升酸性液（Reagent C），鋪滿整個切片表面 8． 室溫下孵育5分鐘 9． 小心移去切片上的酸性液（Reagent C） 10． 重復(fù)實驗步驟7至9二次 11． 小心加上xx微升預(yù)熱的染色工作液，鋪滿整個切片表面 12． 在37℃濕潤培養(yǎng)箱里，孵育3至24小時，或組織細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色（注意：避免液體蒸發(fā)） 13． 小心移去切片上的染色工作液 14． 小心加上xx微升清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面 15． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 16． 放上蓋玻片或封片 17． 即刻在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶活性的地方，呈現(xiàn)藍(lán)色。 注意事項 1． 本產(chǎn)品為50次操作 2． 操作時，須戴手套 3． 本產(chǎn)品的參數(shù)：固著劑種類和濃度、pH、生色底物的選擇和濃度等達(dá)到*優(yōu)化 4． 使用時，避免污染母液，否則出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實驗效果 5． 染色工作液避免光照 6． 切片染色時，須避免光照 7． 染色后的樣品可以在4℃冰箱里長期保存，同樣須避免光照 8． 組織細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性強(qiáng)，孵育3小時即顯示陽性；組織細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性弱，則需要孵育24小時 9． 組織細(xì)胞染色*長孵育時間為24小時 10． 本產(chǎn)品染色敏感，甚至對于微弱表達(dá)的酶活性仍然顯色清晰；用戶可以根據(jù)實際情況調(diào)整孵育時間和染色工作液濃度，使染色恰到好處 11． 孵育時避免液體蒸發(fā) 12． 組織細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色的部位為衰老組織細(xì)胞特異性β-半乳糖苷酶活性的地方 13． 本公司提供系列細(xì)胞衰老檢測試劑產(chǎn)品 上海極威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，主營產(chǎn)品有elisa試劑盒，大鼠elisa試劑盒，小鼠elisa試劑盒，動物血清，細(xì)胞株，標(biāo)準(zhǔn)品，生化試劑盒等。 實驗代做服務(wù)有酶聯(lián)免疫ELISA檢測、生化測試、液相氣相檢測、Icp-MS測試、載體構(gòu)建、RACE、全基因合成、線粒體測序、熒光定量PCR、基因克隆、定點突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環(huán)境微生物多樣性、微生物基因組測序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務(wù)等。極威生物秉承以產(chǎn)品質(zhì)量為根本，以市場需求為導(dǎo)向，以為客戶創(chuàng)造價值為己任的精神，致力于發(fā)展中國的科研事業(yè)。
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